國家獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟國家獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新聯(lián)盟致力于建立獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)發(fā)展信息交流平臺，收集了解產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新過程中的需求，為聯(lián)盟成員單位提供技術(shù)、產(chǎn)品、人力資源、融資和信息、咨詢、培訓(xùn)等綜合服務(wù)；受企業(yè)委托，對科技成果的技術(shù)水平和產(chǎn)業(yè)化前景進行評估；舉辦獸藥行業(yè)技術(shù)創(chuàng)新論壇，加強成員單位間的信息交流，提出切實建議，凝聚產(chǎn)業(yè)共識，積極為國家政策獻言獻策，引導(dǎo)行業(yè)健康發(fā)展。獸用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(VICH)指導(dǎo)原則轉(zhuǎn)化是補充我國獸藥技術(shù)指導(dǎo)原則的一種途徑。對VICH GL43在我國獸藥注冊中的適用性進行研究，并與我國發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則技術(shù)要點進行比較，分析和討論一般靶動物安全試驗和其他情形靶動物安全性試驗在動物選擇、研究設(shè)計、給藥方案、實驗參數(shù)等方面的考慮和要求，并評估其適用性，為獸藥研發(fā)和技術(shù)評審相關(guān)人員提供參考。
技術(shù)指導(dǎo)原則是獸藥注冊技術(shù)評審體系的基石，是對某一知識領(lǐng)域基于當(dāng)前的認(rèn)知所達成的共識，是企業(yè)進行新獸藥研發(fā)的技術(shù)指導(dǎo)文件，也是獸藥技術(shù)評審工作的參考文件。目前，我國獸藥注冊技術(shù)評審體系正在不斷建設(shè)和完善，隨著科學(xué)技術(shù)進步、獸藥研發(fā)和評審需求，需要不斷制修訂技術(shù)指導(dǎo)原則。將國際指導(dǎo)原則進行轉(zhuǎn)化研究并評估其適用性，是補充技術(shù)指導(dǎo)原則的一種途徑。獸用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(VeterinaryInter-nationalConferenceonHarmonization，VICH)指導(dǎo)原則是歐洲共同體(歐盟前身)、美國、日本三方對獸藥注冊技術(shù)要求取得的共識內(nèi)容，包括質(zhì)量控制、安全性和有效性技術(shù)指導(dǎo)原則。對VICH技術(shù)指導(dǎo)原則進行轉(zhuǎn)化適用性研究，尤其是我國獸藥目前尚未制訂的技術(shù)指導(dǎo)原則，對于借鑒關(guān)鍵技術(shù)要點、增強研發(fā)指導(dǎo)、統(tǒng)一評審尺度、促進獸藥國際貿(mào)易均具有重要的意義。
獸用化學(xué)藥品靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則(VICH GL43)于2009年7月開始實施，我國與靶動物安全性相關(guān)的指導(dǎo)原則包括寵物用藥物靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則、蠶藥靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則、畜禽用藥物靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則，與VICH指導(dǎo)原則有不同點。本文對VICH GL43在我國獸藥注冊中的使用適用性進行研究，并與我國發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則技術(shù)要點進行比較，分析和討論一般靶動物安全和特殊情形靶動物安全性試驗在動物選擇、研究設(shè)計、給藥方案、實驗參數(shù)等方面的考慮和要求，并評估各個項目的適用性，適用性采用描述性分析，適用的情形可以直接參考，部分適用的情形可以結(jié)合實際評估后使用，不適用的情形需要按照我國的相關(guān)規(guī)定實施。
VICH GL43要求：安全性研究需要符合GLP要求，受試制劑需要符合cGMP要求；我國指導(dǎo)原則要求：安全性研究需要符合獸藥GCP要求，受試制劑需要在符合GMP要求的車間生產(chǎn)，并提供獸藥檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗合格報告，而我國獸藥GLP/GCP與VICH獸藥GLP/GCP劃分的維度有差異，我國是按靶動物維度劃分獸藥GCP，VICH是按照采用患病動物在田間條件實施臨床試驗的維度劃分獸藥GCP。另外，GMP的管理也有細微差別。VICH GL43適用動物種屬為牛、綿羊、山羊、豬、馬、禽、犬、貓，少數(shù)動物和未包含的靶動物應(yīng)符合擬注冊國家/地區(qū)管理規(guī)定。我國靶動物相關(guān)的指導(dǎo)原則規(guī)定，畜禽用新原料藥制成的制劑可直接參考VICH GL43實施，犬貓用制劑、已有上市原料的禽畜用制劑、蠶用制劑我國有發(fā)布的具體指導(dǎo)原則，可以直接適用。另外，在評價有效性的田間試驗也可以提供必要的靶動物安全性數(shù)據(jù)，我國相關(guān)的指導(dǎo)原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導(dǎo)原則、防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導(dǎo)原則，這些也可以直接使用。因此，指導(dǎo)原則適用的動物種屬要求判定為部分適用。一般靶動物安全性試驗通常采用多倍的擬推薦劑量和/或多倍擬推薦療程來研究受試獸藥的靶動物安全性，識別毒性靶器官和量效關(guān)系，確定安全范圍，提示田間試驗的潛在不良反應(yīng)，并為說明書中的安全警示和使用注意事項提供支撐數(shù)據(jù)。一般靶動物安全性試驗要點的適用性見表1。
基本研究設(shè)計應(yīng)考慮推薦劑量(1X)、給藥時間、給藥途徑、溶劑和注射的最大體積，通常每組使用8只動物。應(yīng)包括與擬上市獸藥給藥體積相同的生理鹽水對照。如果擬上市獸藥非液體制劑，應(yīng)使用合適的陰性對照。應(yīng)特別注意每次注射的位置和時間，以便確定局部癥狀的緩解時間。注射部位研究安全性評價可以包括以下內(nèi)容：臨床體征，包括行為或運動的變化；注射部位的外觀、炎癥、水腫或其他變化；檢測肌酸激酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平；適當(dāng)時間病變的大體病理學(xué)和組織病理學(xué)。如果注射部位存在炎癥，在目視或觸診發(fā)現(xiàn)炎癥在計劃研究結(jié)束時尚未緩解，則應(yīng)確定注射部位炎癥到臨床恢復(fù)所需的時間。如果注射部位臨床體征明顯，可能需要對病變的組織進行病理學(xué)檢查。注射部位的安全性評價內(nèi)容判定為適用，根據(jù)產(chǎn)品特點，可結(jié)合臨床試驗實施。對于外用制劑應(yīng)按照標(biāo)簽擬定劑量評價局部不良反應(yīng)，一般每組8只動物，除非產(chǎn)品的藥理學(xué)和毒理學(xué)證明多倍劑量和/或持續(xù)時間是合理的。具有全身吸收的局部外用制劑，應(yīng)進行一般靶動物安全研究。一般局部不良反應(yīng)應(yīng)該檢查用藥部位的腫脹、疼痛、發(fā)熱、紅斑等臨床體征。應(yīng)注意動物的運動或行為變化。如果注射部位存在炎癥，目視或觸診發(fā)現(xiàn)炎癥在計劃研究結(jié)束時尚未緩解，則應(yīng)確定用藥部位炎癥到臨床恢復(fù)所需的時間。如果用藥部位臨床體征明顯，可能需要對病變的組織進行病理學(xué)檢查。皮膚外用制劑給藥部位安全性內(nèi)容判定為適用，根據(jù)產(chǎn)品特點，可結(jié)合臨床試驗實施。擬用于種畜/種禽具有全身吸收的擬上市獸藥，應(yīng)進行生殖安全性研究，旨在確定擬上市獸藥對雄性或雌性繁殖或后代生存力的不良影響。試驗參數(shù)通常集中于生殖變量，除非藥理毒理學(xué)結(jié)果顯示該獸藥可能影響性成熟，否則不考慮產(chǎn)后期以后后代的生存力。應(yīng)選擇健康、性器官完整、生殖狀態(tài)良好的雄性和雌性動物，代表使用藥物的靶動物種屬、年齡和類別。一般每個給藥組納入每種性別8只動物，雄性和雌性可以在相同或不同的研究中進行評價。通常，在至少一個生精周期給予雄性陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。在育種前(卵泡期直至妊娠)、整個妊娠期(包括胚胎期、胎兒期和出生期)以及在分娩適當(dāng)時間(包括產(chǎn)后期，足以評估后代的初期發(fā)育和運動功能)，給予雌性動物陰性對照和3X劑量的擬上市獸藥。分娩時或分娩前后不需要給藥，除非在特別指明該獸藥在此時間使用。生殖安全性研究應(yīng)酌情評價以下內(nèi)容：雄性動物：精子發(fā)生、精液質(zhì)量和交配行為；雌性動物：發(fā)情周期、交配行為、妊娠率、妊娠時間、分娩和哺乳期；給藥雄性和/或雌性動物的后代：發(fā)育毒理學(xué)(包括致畸性、胎兒毒性)、胎兒發(fā)育、后代數(shù)、生存力和生長、健康和發(fā)育至斷奶；家禽：蛋重、殼厚、由雌禽產(chǎn)蛋數(shù)、蛋繁殖力、孵化率和雛禽生存力。奶牛乳房注入劑應(yīng)進行乳腺安全性研究，所用奶牛應(yīng)無亞臨床或臨床乳腺炎，應(yīng)以每個乳頭給予一個劑量的方式進行試驗，采用標(biāo)簽擬定的使用條件、推薦劑量(1X)和給藥頻率。擬用于泌乳期的，應(yīng)評價藥物對早期至中期泌乳期奶牛的急性炎癥反應(yīng)，擬用于非泌乳期的，應(yīng)評價泌乳期急性炎癥反應(yīng)和非泌乳期慢性炎性反應(yīng)。首選單組自身對照設(shè)計評價每頭奶牛給藥前和給藥后參數(shù)變化，也可以比較給藥組與陰性對照，一般選擇8只泌乳期奶牛，包括4只初乳期奶牛。應(yīng)對所有研究動物進行體檢，包括觸診，以確定腫脹、紅斑、疼痛或發(fā)熱。對于泌乳期動物的任何一種研究設(shè)計，應(yīng)該在給藥前、給藥期和給藥后采集與組織刺激和產(chǎn)乳量相關(guān)的所有相關(guān)變量數(shù)據(jù)。給藥后監(jiān)測期應(yīng)該根據(jù)參數(shù)值恢復(fù)到給藥前參數(shù)值的預(yù)期時間提前規(guī)定。應(yīng)在擠奶前采集每個奶頭樣品用于定量體細胞計數(shù)(SCC)和細菌培養(yǎng)。應(yīng)記錄每日產(chǎn)乳量、組成(例如脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖和非脂肪固體)和外觀。安全性評估的關(guān)鍵變量通常包括乳腺刺激、SCC升高和產(chǎn)乳量變化。不可接受給藥后SCC非常高或SCC延長，并需解釋。田間試驗的靶動物安全性數(shù)據(jù)的適用性進行田間試驗時，應(yīng)同時觀察藥物的不良反應(yīng)。適用。我國發(fā)布相關(guān)指導(dǎo)原則有防治奶牛乳腺炎的抗微生物藥的靶動物安全性和有效性試驗指導(dǎo)原則，防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導(dǎo)原則。從各部分適用性的分析結(jié)果來看，靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則(VICH GL43)的一般靶動物安全部分和特殊靶動物安全內(nèi)容均判定為適用，除了與管理相關(guān)的內(nèi)容存在差異。我國在制定相關(guān)指導(dǎo)原則時充分參考了VICH GL43的所有評價技術(shù)要點，并制定了集結(jié)國內(nèi)專家智慧的特殊指導(dǎo)原則，如蠶用制劑靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則、防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的抗微生物藥物靶動物安全性和有效性試驗指導(dǎo)原則，這對我國還需要補充的指導(dǎo)原則提供了思路和借鑒。但是，VICH指導(dǎo)原則因為是共識內(nèi)容，結(jié)構(gòu)是框架式的，內(nèi)容還不夠詳細，比如，生殖安全性研究，沒有不同種畜/種禽雄性一個生精周期時間和雌性生殖時間的參考數(shù)據(jù)，例如，種禽給藥28天的試驗設(shè)計，可以涵蓋公雞的一個生精周期(13天)、母雞一個發(fā)情周期(1天)、雞蛋形成期(12天)，這些可在轉(zhuǎn)化時進行適當(dāng)補充。當(dāng)臨床評估獲益/風(fēng)險而實驗室數(shù)據(jù)和田間數(shù)據(jù)無法滿足評估需要時，可以補充或擴大靶動物安全試驗內(nèi)容，比如探索毒性的可逆性。基于動物試驗的“4R”原則，即減少(reduc?tion)、優(yōu)化(refinement)、替代(replacement)、責(zé)任 (Responsibility)，我國一般靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則建議的動物數(shù)是每組至少6只動物，與VICHGL43的每組至少8只動物(見表1)略有差異。我國制定指導(dǎo)原則考慮的依據(jù)為靶動物安全性試驗統(tǒng)計不需要采用“拒絕H0假設(shè)”的統(tǒng)計學(xué)方法，即不用必須求出P值，其統(tǒng)計學(xué)方法為描述性分析，比如動物數(shù)量、中位數(shù)、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、最大值、最小值、超出正常范圍的數(shù)量和百分比等。再者，在生殖安全性研究中，應(yīng)采用靶動物進行試驗。但有一種特例，即擬上市獸藥在靶動物與其他動物的藥動學(xué)特性沒有差異，則試驗動物的生殖安全數(shù)據(jù)可以作為支持?jǐn)?shù)據(jù)，但說明書要標(biāo)明“未對靶動物進行生殖安全性研究，在育種、妊娠或泌乳期動物或其后代中的安全性尚未確定”。指導(dǎo)原則不是強制性的法規(guī)文件，而是一種建議，VICH指導(dǎo)原則僅是共識內(nèi)容，因此，一個技術(shù)指導(dǎo)原則無法窮盡所有情形，試驗設(shè)計需要結(jié)合藥物特點、擬用的靶動物特點、適應(yīng)證等等進行具體問題具體分析，用于具體的少見動物和少見適應(yīng)證藥物可能需要單獨制定相關(guān)指導(dǎo)原則。鑒于前述分析，VICH GL43在我國獸藥化學(xué)藥品研發(fā)和注冊時參考使用是適用的。
基金項目： 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所獸藥行業(yè)公益性重點專項“獸用化學(xué)藥品注冊法規(guī)與指導(dǎo)原則研究”（GY202106） 之課題 “ 獸用化學(xué)藥品VICH 指導(dǎo)原則適用性研究”作者簡介：李 丹，碩士，副研究員，從事獸藥注冊評審評價方面工作。
通訊作者：蘇富琴 。E-mail：qinqinsu123@163.com
作者單位：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
文章節(jié)選自中國獸藥雜志2023年7月第57卷第7期《VICH GL43 指導(dǎo)原則適用性研究》
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